尊龙凯时的细胞培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P/S + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺

传代方法：第一次建议1:2传代

传代情况：2天换液

备注：用无菌离心管收集瓶子中的培养基，留作后续对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、接收细胞后的处理

收到细胞后，确保培养至健康状态后，再用完全培养液灌满并封好瓶口。这是运输细胞的最佳做法。收到细胞时，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒后放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后再进行处理。用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x、100x和200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。如果未提供照片，默认收到的细胞状态良好。（传代后可将一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖轻微拧松）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未达到80%汇合度，将完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，悬液转移至离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2培养箱中进行培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，翻转观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001）重悬细胞，混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如需转入液氮罐，需先在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐中。

细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶。用75%酒精擦拭冻存管外壁；将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放在37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养；第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项

有些细胞贴壁不牢，运输过程中容易发生细胞脱落，这属于正常现象。如有大量细胞脱离，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管备用，并对细胞进行胰酶处理以进行培养。

五、售后条款

1）可重发的情况与判定标准：

1. 细胞运输中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等，予以重发。
2. 若细胞出现污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后重发。
3. 常温运输细胞静置24小时后，干冰冷冻运输的细胞复苏后24小时内，若大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 干冰运输的细胞，在复苏后24小时内或常温运输的细胞静置4小时后且未开封出现污染，均可重发。
5. 如细胞活性有问题，请在收到产品7天内提出真实实验结果，并使用台盼蓝染色法检测细胞活力，经核实可重发。
6. 细胞收到当天及第2、3天请拍照，若3天内未告知，将视为产品合格。若4-7天内出现问题且提供前三天的照片及相关操作详细步骤，技术人员判定责任在我方的，予以重发。
7. 技术人员判定责任在双方的，由双方协商处理或按合同价的50%重发。

2）不予重发的情况：

1. 因客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 客户不正确操作导致细胞状态不佳，不予重发。
3. 使用非尊龙凯时推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，不予重发。
4. 细胞状态不佳且未提供培养前3天的照片，不予重发。
5. 细胞在培养时经其他处理的，不予重发。
6. 收到细胞2天内未告知问题，不予重发。
7. 具体情况将另行决定。