尊龙凯时人小细胞肺癌细胞DMS114培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：建议初次1:2传代。每2天更换培养基。

备注：请使用无菌离心管收集培养基以便对比，如果效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，待细胞恢复至良好状态后，加入完全培养液并密封瓶口为最佳处理方式。收到细胞时，需用75%酒精对细胞瓶外表消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片，将默认为细胞状态良好。建议传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基进行对比培养，换液后请适当拧松瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，置于37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，如细胞大部分变圆并脱落，快速将其取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻打散细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱中存放24小时以上后转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，待无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞贴壁不牢，运输过程中可能会出现细胞脱落现象，这是正常的。如脱落严重，可将培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。沉淀后添加胰酶1-2ml，轻轻吹打消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再迅速离心、弃去上清，添加1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例分瓶传代后，补充新的完全培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞问题重发标准

1. 运输途中如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，重发。
2. 如果48小时内收到产品后出现污染，需提供真实实验结果，核实后重发。
3. 常温货物静置24小时或干冰运输细胞复苏后24小时未存活（需提供照片），可重发。
4. 干冰运输的细胞如出现污染，可在规定时间内重发。
5. 细胞活性问题需在7天内提供真实实验结果以获取重发资格。
6. 收到细胞后第1、2、3天拍照，若未告知则视为产品合格。

2）不予重发情况

1. 客户造成的细胞污染情况不予重发。
2. 因客户不当操作细胞状态不佳不重发。
3. 使用非推荐培养体系导致细胞状态欠佳不重发。
4. 缺乏培养前三天照片的细胞状态欠佳不重发。
5. 处理其它程序的细胞不予重发。
6. 收到后2天内未告知的，视具体情况不重发。

如需了解详细信息，请访问尊龙凯时官方网站。我们期待为您提供优质的服务和产品!